Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 4

Poziom białka wzrósł 4 miesiące później, a białkomocz towarzyszył wyraźny wzrost sygnału przeciwciała. Ze względu na rozwój ciężkiego obrzęku rozpoczęto leczenie immunosupresyjne cyklosporyną i prednizonem w małej dawce, co spowodowało zmniejszenie poziomu przeciwciał anty-THSD7A i poziomu białka w moczu do zakresu subnefrotycznego. Drugi pacjent miał ciężką białkomocz i był leczony analogami kortykotropiny, co skutkowało obniżeniem poziomu przeciwciała przeciw THSD7A i poziomem białka w moczu (dane nie pokazane). Przeciwnie, u trzeciego pacjenta, który nie otrzymał leczenia immunosupresyjnego z powodu drobnych problemów klinicznych, poziom przeciwciała utrzymywał się stale na wysokim poziomie z utrzymującym się białkomoczem w zakresie nerczycowym (dane nie przedstawione). Podsumowując, wyniki te sugerują związek między poziomem przeciwciał a kliniczną aktywnością choroby. Ekspresja glomerularnej THSD7A u pacjentów z błony nefropatii i kontroli
Figura 4. Figura 4. Continue reading „Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 4”

Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 3

Kandydujące białka uszeregowano zgodnie z oczekiwaną charakterystyką nowo zidentyfikowanego antygenu w odniesieniu do masy cząsteczkowej, N-glikozylacji, lokalizacji błony i ekspresji w ludzkiej nerce lub kłębuszkach nerkowych. Zastosowaliśmy dostępne w handlu przeciwciała i przejściowo transfekowane komórki ludzkich zarodkowych komórek nerkowych (HEK) 293 w celu specyficznego testowania potencjalnych antygenów (dane niepokazane) i ostatecznie zidentyfikowano 7A (THSD7A) zawierającą domenę 7 typu trombospondyny jako białko będące przedmiotem zainteresowania. Rysunek 2. Rysunek 2. Identyfikacja docelowego antygenu. Panel A pokazuje reaktywność próbek surowicy z ludzkimi ekstraktami kłębuszkowymi (HGE) i 7A rekombinowanym trombosponiną typu (rTHSD7A). Jedynie próbki od pacjentów z nefropatią błoniastą (MN), które wcześniej rozpoznały białko 250-kD obecne w HGE, rozpoznały również rTHSD7A (MN 1, MN 2 i MN 3). Continue reading „Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 3”

Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 2

Immunoprecypitaty zebrano, poddano elektroforezie, przeniesiono na błonę i zbadano pod kątem obecności białka THSD7A przy użyciu przeciwciał anty-THSD7A (Przeciwciała Atlas), jak opisano powyżej. Spekrtometria masy
Regiony żelowe odpowiadające widocznym prążkom w blotach Western wycięto i poddano trawieniu trypsyną w żelu. Strawione peptydy zidentyfikowano za pomocą spektrometrii masowej, jak opisano w dodatkowym dodatku.
Analiza histologiczna i elucja autoprzeciwciał
Immunofluorescencję i analizy immunohistochemiczne ekspresji THSD7A w zdrowych i chorych nerkach i eksperymentach z wymywaniem autoprzeciwciał przeprowadzono zgodnie z opisem w Dodatkowym Dodatku.
Wyniki
Badanie przesiewowe próbek surowicy za pomocą ludzkiego ekstraktu z kłębuszkowego białka
Ryc. 1. Ryc. Continue reading „Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 2”

Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej

Idiopatyczna nefropatia błoniasta jest chorobą autoimmunologiczną. U około 70% pacjentów jest on związany z autoprzeciwciałami przeciwko receptorowi fosfolipazy A2 (PLA2R1). Cele antygenowe u pozostałych pacjentów są nieznane. Metody
Przy użyciu metody Western blot przeszukaliśmy próbki surowicy od pacjentów z idiopatyczną nefropatią błoniastą, pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i zdrowymi kontrolami przeciwciał przeciwko ludzkim natywnym białkom kłębuszkowym. Częściowo oczyszczono domniemany nowy antygen, zidentyfikowano to białko za pomocą spektrometrii mas trawionych peptydów i potwierdzono wyniki przez analizę ekspresji rekombinowanego białka, immunoprecypitacji i analizy immunohistochemicznej.
Wyniki
Próbki surowicy od 6 z 44 pacjentów w kohorcie europejskiej i 9 z 110 pacjentów w kohorcie Boston z ujemną pod względem anty-PLA2R1 ujemną błoniastą nefropatią rozpoznawały białko kłębuszkowe o wielkości 250 kD. Żadna z próbek surowicy od 74 pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią, którzy byli seropozytywni w kierunku przeciwciał anty-PLA2R1, od 76 pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i od 44 zdrowych kontroli reagowało przeciw temu antygenowi. Continue reading „Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej”

Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi AD 4

Obserwacja pojedynczej mutacji somatycznej w egzomie była powszechna w każdym wieku, w przeciwieństwie do silnie uzależnionego od wieku nabycia klonoplanowej krwi z kandydatami (Ryc. S13 w Dodatku Uzupełniającym). Jednak obecność dwóch wykrywalnych domniemanych mutacji somatycznych była bardziej zależna od wieku, występująca u 1,3% osób w wieku poniżej 50 lat w porównaniu z 4,0% osób w wieku powyżej 65 lat (ryc. S13 w Dodatku uzupełniającym) . Obecność trzech lub więcej przypuszczalnych mutacji somatycznych (nasze kryterium hematopoezy klonalnej u nieznanych kierowców) była silniej zależna od wieku, występowała jedynie u 0,3% osób w wieku poniżej 50 lat, ale u 4,6% osób w wieku powyżej 65 lat wiek (rysunek 2D). Ta trajektoria wieku jest podobna do trajektorii klonalnej hematopoezy u kandydatów na kierowców. Ogólnie, hematopoezę klonalną z kandydatami lub nieznanymi kierowcami zaobserwowano u 0,9% uczestników w wieku poniżej 50 lat, ale u 10,4% osób w wieku powyżej 65 lat (wykres 2D). Continue reading „Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi AD 4”

Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi AD 3

Spośród 15 skracających białek mutacji obserwowanych w PPM1D, 12 wystąpiło w ostatnim eksonie, który jest również miejscem mutacji skracających białka opisanych u pacjentów z nowotworem.24-27 Zgubiono domenę C-terminalnej lokalizacji PPM1D. aktywować PPM1D, tłumić p53, a tym samym osłabiać zależny od p53 punkt kontrolny G1, promując proliferację. Mutacje somatyczne w DNMT3A również charakteryzowały się znacznym nadmiarem mutacji missense (P <0,001) (Figura 2A), wszystkie zlokalizowane w eksonach 7 do 23, i zostały wzbogacone o mutacje tworzące cysteinę (Fig. S9 w Dodatku Uzupełniającym). Takie mutacje potencjalnie wywierają dominujący negatywny wpływ na tetrameryczny kompleks białkowy DNMT3A (szczegóły w Dodatku Uzupełniającym).
Ponieważ DNMT3A, TET2 i ASXL1 są często zmutowane w rakach hematologicznych, 28,29 postawiliśmy hipotezę, że inne nawracające mutacje nowotworowe mogą również promować hematopoezę klonalną. Dlatego uznaliśmy, że 208 konkretnych wariantów zgłoszono jako nawracające (występujące u .7 pacjentów) w raku krwiakowatym i limfoidalnym, zgodnie z wykazem w Katalogu Mutacji Somatycznych w Raku 30 (szczegóły w Dodatku Uzupełniającym). Continue reading „Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi AD 3”

Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi AD 2

Traktowaliśmy pacjentów i grupę kontrolną jako pojedynczą grupę dla wszystkich analiz przedstawionych poniżej, ponieważ żadna z analizowanych zmiennych mutacyjnych nie wykazała istotnego związku z diagnozą psychiatryczną po tym, jak kontrolowaliśmy inne czynniki, takie jak wiek i palenie tytoniu. DNA ekstrahowano bezpośrednio z próbek krwi obwodowej żył. Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez odpowiednie komisje etyczne, a pisemna zgoda została uzyskana od wszystkich uczestników. Metody sekwencjonowania i analizy DNA zostały szczegółowo opisane w Dodatku Uzupełniającym. Identyfikacja mutacji somatycznych
Rysunek 1. Rysunek 1. Ekspansja klonalna i frakcje alleliczne. Continue reading „Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi AD 2”

Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi

Nowotwory powstają na skutek wielu nabytych mutacji, które przypuszczalnie występują przez wiele lat. Wczesne stadium rozwoju raka może być obecne na wiele lat przed wystąpieniem klinicznie oczywistych nowotworów. Metody
Przeanalizowaliśmy dane z sekwencjonowania całego egzema DNA w komórkach krwi obwodowej od 12 380 osób, niewyselekcjonowanych z powodu raka lub fenotypów hematologicznych. Zidentyfikowaliśmy mutacje somatyczne na podstawie nietypowych frakcji allelicznych. Wykorzystaliśmy dane ze szwedzkich krajowych rejestrów pacjentów, aby śledzić wyniki zdrowotne przez 2 do 7 lat po pobraniu próbek DNA.
Wyniki
Hemopoezę klonalną z mutacjami somatycznymi obserwowano u 10% osób w wieku powyżej 65 lat, ale tylko u 1% osób w wieku poniżej 50 lat. Wykrywalne ekspansje klonalne najczęściej obejmowały mutacje somatyczne w trzech genach (DNMT3A, ASXL1 i TET2), które wcześniej wiązały się z nowotworami hematologicznymi. Continue reading „Klonowa hematopoeza i ryzyko zachorowania na raka spowodowane wnioskami z sekwencji DNA krwi”

Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 6

Barwienie próbki z biopsji pod kątem obecności antygenu (THSD7A lub PLA2R1) może identyfikować niewielki dodatkowy odsetek pacjentów, których surowica została pobrana z próbki po wystąpieniu remisji immunologicznej.12,15 Łącznie nefropatia błoniasta związana z THSD7A i PLA2R1 może obecnie stanowią około 75 do 85% przypadków, co dodatkowo pomaga odróżnić idiopatyczną od wtórnej nefropatii błoniastej. Pozostałe 15 do 25% przypadków może obejmować jeszcze niezidentyfikowane autoantygeny, które różnią się od THSD7A i PLA2R1 lub mogą zostać błędnie sklasyfikowane jako idiopatyczne z powodu niewykrytej wtórnej przyczyny choroby. THSD7A początkowo scharakteryzowano jako białko śródbłonkowe, które ulega ekspresji w układzie naczyniowym9. Wykazaliśmy przez analizę immunohistologiczną, że THSD7A jest skoncentrowany w podstawowym aspekcie podocytu, i nie znaleźliśmy żadnej ekspresji w kłębuszkowych komórkach śródbłonka. To odkrycie jest zgodne z ostatnimi danymi, które pokazują, że THSD7A jest silniej eksprymowany w podocytach niż w komórkach śródbłonka kłębuszkowego i mezangialnego.16 Na podstawie tych danych eksperymentalnych, naszych obecnych wyników immunohistologicznych i poprzednich danych od pacjentów z innymi postaciami nefropatii błoniastej 2,17 uważamy, że prawdopodobny mechanizm błoniastej nefropatii związanej z THSD7A obejmuje tworzenie kompleksu immunologicznego in situ z THSD7A związanym z podocytem. Nasza niezdolność do wykrywania krążących rozpuszczalnych kompleksów immunologicznych THSD7A lub THSD7A-anty-THSD7A dodatkowo potwierdza ten pogląd. Jednak nie możemy całkowicie wykluczyć obecności krążących rozpuszczalnych kompleksów immunologicznych THSD7A lub THSD7A-anty-THSD7A z powodu możliwego braku czułości naszych testów. Continue reading „Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej AD 6”

Intensywna terapia cukrzycy i chirurgia oczu w cukrzycy typu 1 AD 3

Do celów tych analiz, pacjenci, którzy wykonywali jedną lub więcej operacji oka, zostali zakwalifikowani jako pacjenci z dowolną operacją. Ponadto przeanalizowano całkowitą liczbę operacji ( wszystkie ). Usunięcie zaćmy i witrektomia, chirurgia odwodząca siatkówki lub oba zostały przeanalizowane osobno ze względu na ich wysoką częstotliwość. Skumulowana częstość występowania każdego wyniku została oszacowana za pomocą metody Graya, w której śmierć stanowi konkurencyjne ryzyko17
Modele proporcjonalnego hazardu Coxa zostały użyte do oceny wpływu współzmiennych na ryzyko specyficzne dla przyczyny chirurgii ocznej.18 Do obliczenia limitów ufności i wartości P użyto rzetelnej estymacji macierzy kowariancji zgodnie z metodą Lin i Wei. są prawidłowe, gdy założenia dotyczące proporcjonalnych zagrożeń są naruszone.19 Modele regresji Poissona z solidnym oszacowaniem macierzy kowariancji oszacowały ryzyko wszystkich operacji, pozwalając na wiele operacji dla każdego pacjenta.
Koszt operacji ocznej został obliczony w dolarach amerykańskich w 2010 r. Z wykorzystaniem wskaźnika cen konsumpcyjnych opieki zdrowotnej20,20, a także z wykorzystaniem zdyskontowanych dolarów, aby uwzględnić roczną stopę inflacji w wysokości 3%. Continue reading „Intensywna terapia cukrzycy i chirurgia oczu w cukrzycy typu 1 AD 3”