Zawierająca domenę 7 typu thrombospondyna w idiopatycznej nefropatii błoniastej

Idiopatyczna nefropatia błoniasta jest chorobą autoimmunologiczną. U około 70% pacjentów jest on związany z autoprzeciwciałami przeciwko receptorowi fosfolipazy A2 (PLA2R1). Cele antygenowe u pozostałych pacjentów są nieznane. Metody
Przy użyciu metody Western blot przeszukaliśmy próbki surowicy od pacjentów z idiopatyczną nefropatią błoniastą, pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i zdrowymi kontrolami przeciwciał przeciwko ludzkim natywnym białkom kłębuszkowym. Częściowo oczyszczono domniemany nowy antygen, zidentyfikowano to białko za pomocą spektrometrii mas trawionych peptydów i potwierdzono wyniki przez analizę ekspresji rekombinowanego białka, immunoprecypitacji i analizy immunohistochemicznej.
Wyniki
Próbki surowicy od 6 z 44 pacjentów w kohorcie europejskiej i 9 z 110 pacjentów w kohorcie Boston z ujemną pod względem anty-PLA2R1 ujemną błoniastą nefropatią rozpoznawały białko kłębuszkowe o wielkości 250 kD. Żadna z próbek surowicy od 74 pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią, którzy byli seropozytywni w kierunku przeciwciał anty-PLA2R1, od 76 pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i od 44 zdrowych kontroli reagowało przeciw temu antygenowi. Chociaż ten nowo zidentyfikowany antygen wyraźnie różni się od PLA2R1, ma pewne cechy biochemiczne, takie jak N-glikozylacja, lokalizacja błonowa i reaktywność z surowicą tylko w warunkach nieredukujących. Spektrometria mas zidentyfikowała ten antygen jako domena 7A zawierająca thrombospondinę typu (THSD7A). Wszystkie reaktywne próbki surowicy rozpoznały rekombinowany THSD7A i immunoprecypitowany THSD7A z lizatów kłębuszkowych. Ponadto, analizy immunohistochemiczne próbek pobranych od pacjentów z biopsji ujawniły lokalizację THSD7A na podocytach, a IgG eluowane z jednej z tych próbek było specyficzne dla THSD7A.
Wnioski
W naszej kohorcie 15 z 154 pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią miało krążące autoprzeciwciała przeciwko THSD7A, ale nie na PLA2R1, co sugeruje odrębną podgrupę pacjentów z tym stanem. (Finansowane przez Francuskie Narodowe Centrum Badań Naukowych i inne.)
Wprowadzenie
Idiopatyczna nefropatia błoniasta jest chorobą autoimmunologiczną i częstą przyczyną zespołu nerczycowego u dorosłych.1 W 2009 r. Jako główny antygen zaangażowany w patogenezę odkryto receptor fosfolipazy A2 (PLA2R1), białko, które ulega ekspresji w podocytach kłębuszkowych. dorosłych idiopatycznych błon śluzowych.2 Jak potwierdzono w wielu kolejnych badaniach, około 70% pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią ma autoprzeciwciała w krążeniu przeciwko PLA2R1.2-6. Pozostali pacjenci, około 30% z idiopatyczną błoniastą nefropatią, nie mają oczywiste wtórne przyczyny choroby, i uważa się, że inne endogenne antygeny kłębuszkowe mogą być zaangażowane w tych przypadkach.
W bieżącym badaniu analizowaliśmy próbki surowicy od pacjentów z idiopatyczną błoniastą nefropatią, a także próbki od pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i zdrowymi kontrolami, aby zidentyfikować krążące przeciwciała przeciwko antygenom kłębuszkowym innym niż PLA2R1.
Metody
Pacjenci
Rozpoznanie nefropatii błoniastej dokonano za pomocą biopsji nerek. Próbki surowicy uzyskano od pacjentów z błoniastą nefropatią oraz od pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i zdrowymi kontrolami i badano na przeciwciała anty-PLA2R1 z zastosowaniem testu immunoenzymatycznego (ELISA) 7 i analizy Western blot.2 Wszyscy uczestnicy badania wyraził pisemną zgodę, a badanie przeprowadzono zgodnie z postanowieniami Deklaracji Helsińskiej. Szczegółowy opis kohort i charakterystyki pacjenta przedstawiono w Dodatku uzupełniającym, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie.
Ludzka tkanka nerek
Zdrowe porcje nefrektomizowanych nerek i korę nerki z nerek dawcy ludzkiego, które uznano za nieodpowiednie do przeszczepu, zastosowano do przygotowania ekstraktu białkowego kłębuszków. Dodatkowe szczegóły można znaleźć w sekcji Metody w dodatkowym dodatku.
Analiza Western Blot
Elektroforezę żelową i transfer białka do membran z difluorku poliwinylidenu przeprowadzono zgodnie ze standardowymi protokołami. Do zastosowania jako pierwszorzędowe przeciwciało, surowicę rozcieńczono w stosunku 1: 100. W celu specyficznego wykrywania THSD7A, wykorzystano dostępne w handlu królicze przeciwciało poliklonalne w rozcieńczeniu 1: 1000 (Przeciwciała atlasowe).
Immunoprecypitacja
Ludzkie ekstrakty kłębuszkowe inkubowano przez noc z próbkami surowicy od pacjentów z błoniastą nefropatią, od pacjentów z innymi chorobami kłębuszkowymi i od zdrowych osób z grupy kontrolnej, i dodano macierz powinowactwa IgG4 (Life Technologies).
[hasła pokrewne: usuwanie blizn potrądzikowych, RTG panoramiczne, łokieć golfisty ]

Powiązane tematy z artykułem: łokieć golfisty RTG panoramiczne usuwanie blizn potrądzikowych